PCR南宫28污染是导致实验假阳性、结果不可信的重要原因。为了避免和处理PCR南宫28污染,南宫28未来建议可以从以下几个方面进行:
避免PCR南宫28污染的措施
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严格分区与标识:
- 南宫28应明确划分为试剂准备区、样本制备区、扩增区、产物分析区,各区域间不可逆行。
- 各区域的实验用品应专用,并设置不同的标识、颜色等予以区分,以避免混淆和交叉污染。
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规范实验操作:
- 实验应在超净工作台或生物安全柜内进行,工作台内应放置PCR专用的微量离心机、各量程的移液器和其他必要物品。
- 实验过程中应选择合适尺寸的手套,并及时更换。进出不同实验区域或进行模板操作后,应更换实验服、口罩、帽子及手套。
- 装有PCR试剂的反应管在打开之前应先瞬时离心,将管壁及管盖上的液体离至管底,以降低污染手套或加样器的风险。
- 吸加试剂和模板的操作应严格按照规范要求进行,遵守“慢吸快打”原则,尽量一次性完成,避免多次抽吸产生气溶胶导致交叉污染。
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试剂与样本管理:
- PCR试剂建议小量分装,以减少反复冻融、重复取样次数和反复使用过程中的试剂污染。
- 多样本PCR反应时,先配制反应混合液分装至反应管中,最后加入样本核酸,避免同时开盖导致交叉污染。
- 实验试剂应与样品和PCR产物分开保存,不应放于同处。
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严格控制人员流动与物品流向:
- 严格控制进出南宫28的人员,减少不必要的走动以降低交叉污染的可能性。
- 物品流向应严格按照试剂准备区、样本制备区、扩增区、产物分析区的顺序进行,不可逆行。
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加强清洁与消毒:
- 南宫28自配试剂(如去离子水、缓冲液等)和所有使用器具在使用之前均应高压灭菌或紫外杀菌。
- 枪尖、反应管等实验耗材应一次性使用,避免重复使用导致的污染。
- 实验结束后应对操作台面、仪器、实验用具及环境进行清洁和消毒。
处理PCR南宫28污染的措施
- 立即停止实验:一旦发现污染,应立即停止所有实验操作,避免污染扩散。
- 寻找污染来源:清理南宫28内所有物品,仔细查找污染来源,以便采取针对性的处理措施。
- 加强通风与消毒:加大南宫28的通风量,对南宫28内所有表面(台面、地面及墙面)进行消毒处理。可以使用有效的消毒剂(如次氯酸消毒剂)进行擦拭和喷洒消毒,并用75%酒精进行空中喷雾消毒。
- 开启紫外消毒装置:开启紫外消毒装置,延长紫外照射时间(如4小时以上),以杀灭空气中的微生物和消除气溶胶污染。
- 连续检测与验证:采取上述措施后,应连续进行试剂空白检测,确认无污染后方可恢复常规检测。通常建议连续3次检测均阴性后方可进行常规检测。